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    GV3101電擊感受態細胞
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    產品名稱: GV3101電擊感受態細胞
    產品型號: SGn306
    CAS號:
    英文名稱:
    規格: 農桿菌電擊感受態
    包裝: 10*50ul
    產品報價: 市場價(面議)





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    產品描述
    中文名稱:GV3101電擊感受態細胞  
    規格:0.1ml*10支  
    用途:生化試劑。(用于科研試驗研究)  
    保存:-80℃  
    基因型  
    C58(rifR)TipMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline  
    產品說明  
    GV3101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti質粒含有篩選標簽:Strep和gent,賦予GV3101菌株鏈霉素和慶大霉素抗性,適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。GV3101電轉感受態特別適用于大質粒的轉化:經pCAMBIA2301質粒(size:11633bp)檢測轉化效率可達5×104cfu/μg;經pCAMBIA2301-ZH質粒(size:40kd)檢測轉化效率可達5×103cfu/μg。  
    操作方法  
    1.0.2cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。  
    2.取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘,待其融化,加入1-5ug質粒DNA(質粒體積不大于6ul,最好用試劑盒抽提,雙蒸水溶解),用手撥打管底混勻,立即插入冰中,用200ul槍頭將感受態-質;旌衔锟焖僖频诫姄舯,蓋上杯蓋,空管保留待用。  
    3.啟動電轉儀,設置參數:C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此參數為Biorad推薦,使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700ul無抗生素的LB并轉移到感受態空管中,28℃振蕩培養2~3小時。  
    4.6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天(當平板只含有50ug/mlkan時,28℃培養48h即可;平板中同時加入50ug/mlkan,20ug/mlrif時,需28℃培養60h;如果使用的平板含有50ug/mlrif則需要28℃培養72-90h)。  
    注意事項  
    1.感受態細胞最好在冰上融化。  
    2.混入質粒時應輕柔操作。  
    3.轉化高濃度的質?上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

    1、農桿菌相關抗生素配方:

    抗生素

    配方

    原液濃度

    工作濃度

    羧芐青霉素 (carb)

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    硫酸卡那霉素 (kan)

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    50 mg/ml

    50 μg/ml

    鏈霉素 (strep)

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    10 mg/ml

    50 μg/ml

    利福平 (rif)

    DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    10 mg/ml

    20 μg/ml

    慶大霉素 (gent)

    雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

    20 mg/ml

    40 μg/ml

    2、常用農桿菌抗性: (R:抗;S:敏感。)

    農桿菌菌株

    羧芐青霉素(carb)

    鏈霉素(strep)

    利福平(rif)

    慶大霉素(gent)

    硫酸卡那霉素(kan)

    AGL-1

    R

    R

    R

    S

    S

    EHA101

    S

    R

    R

    S

    R

    EHA105

    S

    R

    R

    S

    S

    LBA4404

    S

    R

    R

    S

    S

    GV3101

    S

    R

    R

    R

    S

    3、LB及YEB配方:

    component

    LB(液體)/L

    LB(固體)/L

    component

    YEB(液體)/L

    YEB(固體)/L

    Tryptone

    10 g

    10 g

    Tryptone

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    5 g

    5 g

    Yeast extract

    1 g

    1 g

    NaCl

    10 g

    10 g

    牛肉浸膏

    5 g

    5 g

    NaOH

    調PH到7.0

    調PH到7.0

    蔗糖

    5 g

    5 g

    Agar

    15 g

    MgSO4*7H2O

    0.49 g

    0.49 g

     

     

     

    NaOH

    調PH到7.0

    調PH到7.0

     

     

     

    Agar

    15 g

     


     
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